Qual é a diferença entre DAPI e Hoechst

A principal diferença entre DAPI e Hoechst é que DAPI é um corante útil na coloração do conteúdo de DNA em células fixas, enquanto Hoechst é um corante útil na coloração do conteúdo de DNA em células vivas.

A coloração diferencial do ciclo celular é um método muito importante. Permite a coloração de DNA e RNA, permitindo a determinação do conteúdo de DNA ou RNA nas células. Isso, por sua vez, permite discriminar diferentes fases do ciclo celular, como G(0), G(1) e diferenciação celular. Existem diferentes corantes para a coloração diferencial das células. DAPI e Hoechst são dois tipos de corantes usados ​​na coloração diferencial de células.

CONTEÚDO

1. Visão geral e principal diferença
2. O que é DAPI
3. O que é Hoechst
4. Semelhanças – DAPI e Hoechst
5. DAPI vs Hoechst em forma tabular
6. Resumo – DAPI vs Hoechst

O que é DAPI?

DAPI é um corante fluorescente. Ele se liga fortemente a regiões ricas em adenina e timina no DNA. Esta coloração é amplamente utilizada em microscopia de fluorescência. Esta mancha também é conhecida como DAPPY ou 4,6-diamidino-2-fenilindol. Como o DAPI pode passar por uma membrana celular intacta, ele pode ser usado para manchar o conteúdo de DNA nas células. No entanto, tem baixa permeabilidade celular, por isso é geralmente usado para corar o conteúdo de DNA em células fixadas. O DAPI é excitado pela luz ultravioleta em torno de um comprimento de onda de 358 nm e emite luz fluorescente azul-ciano em torno de um espectro de emissão máximo de 461 nm.

Figura 01: DAPI

O DAPI foi sintetizado pela primeira vez em 1971 no laboratório de Otto Dann, Erlangen, como uma droga contra a tripanossomíase. Mas não teve sucesso como droga. Investigações posteriores revelaram que ele se liga fortemente ao DNA e se torna mais fluorescente quando ligado ao DNA. Isso levou ao seu uso na identificação do conteúdo de DNA. O primeiro uso registrado de DAP1 como uma mancha de DNA fluorescente foi no ano de 1975 na identificação de DNA mitocondrial em ultracentrifugação.

Além disso, o DAPI é normalmente rotulado como não tóxico em seu MSDS (folha de dados de segurança do material). De qualquer forma, como é um pequeno composto de ligação ao DNA, é provável que tenha alguns efeitos cancerígenos. Portanto, deve-se ter cuidado ao manusear e descartar corantes DAPI.

O que é Hoechst?

Hoechst faz parte da família de corantes fluorescentes azuis. Tem alta permeabilidade celular, por isso pode ser usado para detectar o conteúdo de DNA de células vivas. Hoechst é uma bisbenzimida, que é um composto orgânico. Existem normalmente três corantes Hoechst relacionados usados ​​na coloração de DNA: Hoechst 33258, Hoechst 33342 e Hoechst 34580. No entanto, os corantes Hoechst 33258 e Hoechst 33342 são os mais comumente usados ​​em laboratórios. Além disso, Hoechst 33258 e Hoechst 33342 têm espectros de emissão-excitação semelhantes. Ambos os corantes são excitados pela luz ultravioleta em torno de um comprimento de onda de 350 nm. Eles emitem luz fluorescente azul-ciano em torno de um espectro de emissão máximo de 461 nm.

Figura 02: Hoechst

Hoechst tem diferentes aplicações: microscopia fluorescente e imuno-histoquímica, citometria de fluxo para contar ou classificar células, coloração diferencial do ciclo celular, detecção de DNA na presença de RNA em géis de agarose, determinação automatizada de DNA e classificação cromossômica. Além disso, podem interferir na replicação do DNA durante a divisão celular, sendo potencialmente mutagênicos e carcinogênicos. Portanto, deve-se ter cuidado ao manusear e descartar o corante Hoechst.

Quais são as semelhanças entre DAPI e Hoechst?

DAPI e Hoechst são dois tipos de corantes usados ​​para a coloração diferencial de células. São corantes fluorescentes azuis. Ambas as manchas preferem a ligação com as regiões ricas em A/T no DNA. São pequenas manchas de ligação ao bosque. Ambas as manchas são visíveis usando as mesmas configurações de filtro do equipamento. Eles podem ser cancerígenos.

Qual é a diferença entre DAPI e Hoechst?

DAPI é um corante que é normalmente usado para corar o conteúdo de DNA em células fixas, enquanto Hoechst é um corante que é normalmente usado para corar o conteúdo de DNA em células vivas. Assim, esta é a principal diferença entre DAPI e Hoechst. Além disso, DAPI tem baixa permeabilidade celular, enquanto Hoechst tem alta permeabilidade celular.

O infográfico abaixo apresenta as diferenças entre DAPI e Hoechst em forma de tabela para comparação lado a lado.

Resumo – DAPI vs Hoechst

A coloração do DNA é um aspecto muito importante na determinação do conteúdo de DNA de uma célula. DAPI e Hoechst são dois corantes fluorescentes azuis usados ​​para a coloração diferencial de células. Ambas as manchas são usadas em microscopia fluorescente e são pequenas manchas de ligação de bosque no DNA. No entanto, DAPI é normalmente usado para coloração de conteúdo de DNA em células fixas devido à sua baixa permeabilidade de membrana, enquanto Hoechst é normalmente usado para coloração de conteúdo de DNA em células vivas devido à sua alta permeabilidade de membrana. Portanto, isso resume a diferença entre DAPI e Hoechst.

Referência:

1. “Dapi.” Uma visão geral | Tópicos ScienceDirect.
2. Scharenberg, Christian W., et al. “O transportador ABCG2 é uma bomba de efluxo Hoechst 33342 eficiente e é preferencialmente expresso por progenitores hematopoiéticos humanos imaturos.” Sociedade Americana de Hematologia.

Cortesia da imagem:

1. “38F3-ChkNFH-DAPI-Shsy5y” Por GerryShaw – Trabalho próprio (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia
2. “Estrutura dos corantes Hoechst” Por Crenim – Trabalho próprio (CC0) via Commons Wikimedia

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